尊龙凯时人β干扰素(IFN-β)ELISA试剂盒的使用说明。本试剂盒仅限于科学研究用途，不得用作医学诊断。

试剂盒原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先涂覆有adropin（AD）抗体的微孔板中，依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经过温育后彻底洗涤。随后，使用底物TMB进行显色反应，TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再在酸的作用下转化为黄色。颜色深浅与样品中adropin（AD）的含量呈正相关，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），进而计算样品浓度。

样本收集与处理

1. 血清：选择不含热原及内毒素的试管，避免细胞刺激。采血后以3000转离心10分钟迅速分离出血清与红细胞。

2. 血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素进行抗凝，3000转离心30分钟以取上清液。

3. 细胞上清液：以3000转离心10分钟去除颗粒与聚合物。

4. 组织匀浆：将组织与适量生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本未能及时检测，请按单次使用量分装并冻结于-20℃，避免反复冻融，解冻时在室温下充分均匀解冻。

实验材料准备

尊龙凯时试剂盒包括以下组成：

• 微孔酶标板：96孔或48孔配置
• 标准品：0、25、50、100、200、400pg/mL
• 洗涤缓冲液：20×稀释至1：20使用
• 底物A与B
• 终止液

实验操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需的板条，剩余部分密封好，放回4℃保存。

2. 按照设计设置标准品与样本孔，标准品孔各加50μL不同浓度的标准品。

3. 在样本孔中先加入10μL待测样本，再加入40μL样本稀释液，空白孔不加任何成分。

4. 除空白孔外，在标准品孔与样本孔中加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，封住反应孔并在37℃下水浴温育60分钟。

5. 弃去反应液，添加洗涤液并静置1分钟，重复洗板5次以确保完全清洗。

6. 每孔中加入底物A和B各50μL，在37℃避光孵育15分钟。

7. 加入终止液50μL，随后在15分钟内于450nm波长下测定各孔的OD值。

结果分析

通过Excel绘制标准曲线，以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，进行线性回归计算样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归R值应大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. 特异性：不与其他可溶性结构相似物交叉反应。

4. 重复性：板内与板间变异系数均小于15%。

5. 储存条件：保持在2-8℃，避免光照和潮湿。

6. 有效期：6个月。

免责声明

1. 本试剂盒仅用于研究目的，严禁用于临床或人体实验，所产生的后果由实验者自行承担，尊龙凯时不承担任何责任。

2. 实验者须严格按照说明书进行操作，若有违反，后果由实验者负责。