### 尊龙凯时乙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，无需复杂准备。
2. 高灵敏度：引物等组分经过优化，灵敏度显著提高。
3. 阳性对照：提供阳性对照，有助于区分假阴性样品。
4. 高特异性：引物设计基于乙型流感病毒高度保守区域，不与其他生物样本DNA交叉反应。
5. 多功能性：既可实现定性检测，还可进行定量检测，定量时线性范围至少为五个数量级。
6. 使用量大：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 适用性：本产品仅限于科研使用。

#### 使用方法：

第一步：DNA提取（样本制备区）
采用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒兼容市场上大多数核酸提取试剂盒。

第二步：稀释标准曲线样品（样本制备区）
为避免污染，应在独立区域进行以下操作：
1. 标记6个离心管，分别标记为7、6、5、4、3、2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照（由试剂盒提供），充分震荡1分钟，得1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上待用。
4. 更换枪头，将5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照添加到6号管中，震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
5. 按照上述方法依次进行稀释，获得所需的6个稀释度的标准曲线样品。
6. 如无需标准曲线，将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

第三步：试剂配制（试剂准备区）
若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（包括1个阴性对照和6个阳性对照），根据详细说明书向各PCR管中加入相应成分，并转移至样本准备区。

第四步：添加模板（模板添加区）
向qPCR管中分别加入2μL模板，按照顺序添加阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

第五步：扩增反应（扩增及产物分析区）
将PCR管放置在PCR扩增仪器的样品槽对应位置，执行扩增程序（详细信息请参考说明书）。

第六步：结果分析
1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，根据待测样品的Ct值计算其DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判断结果：阳性对照：Ct值<30且有明显指数增长，呈典型S型曲线；阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指标增长；样本检测结果：Ct值<35表示样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值则表明样本未检测到该虫，结果为阴性；若Ct值在35-38范围，应进行复检，若重复测试仍在该范围且有明显增长，判定为阳性，否则视为阴性。

#### 运输及保存：

本产品应低温运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，以避免污染其他试剂。